H2O2含量是根据Erich Warm (1982) 的方法的测定的。即把样品分成两等分,一个加入H2O2,另一个不加入H2O2,再设一个H2O2标准量。每5g的样品加入25ml的5% TCA (凉)研磨后,每25ml添加3.3μmol的H2O2。用12000×g离心30 min,取1ml上清液用100mg的离子交换树脂DOWEX (1×8 100-200 Cl FORM 0.7×4cm)通过两次以上。渗出的溶液里分别加入0.5mM的鲁米诺500μl和0.5mM的亚铁氧化钾1000μl,用荧光化学发光测定仪(PSN AB-2200型,BIO-INSTRUMENT ATTO社製) 测定其发光量。然后,在30℃加温水槽里加热10 min后,再次测定其荧光发光量,从不同的化学发光量中计算出正确的发光值。
1.4酶的提取和酶活性的测定
在冷冻的0.3g样品里加入液体氮研磨。研磨后的样品每1g加入3.5ml的缓冲液[0.4mM EDTA,1mM维生素C,含有2%(W/V)PVP的25mM磷酸钾缓冲液(pH7.0) ]搅拌后,离心25min(4℃,14000rpm),取得的上清液为过氧化氢酶的粗酶提取液。