1.2.1细胞分组干预:人肾小球系膜细胞复苏后用含5%胎牛血清的RPMI 1640培养基传代培养,将处于对数生长期的系膜细胞分为5组:正常糖组(NC组):葡萄糖浓度11.11mmol/L;高渗对照组(HOS组):葡萄糖浓度11.11mmol/L+甘露醇浓度18.89mmol/L;低糖组(LG组):葡萄糖浓度3.3mmol/L;高糖组(HG组):葡萄糖浓度30mmol/L;波动糖组(FG组):细胞交替培养在葡萄糖浓度3.3mmol/L及葡萄糖浓度30mmol/L的培养基中,12h更换一次培养基。共干预48h。
1.2.2 AnnexinⅤ/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡率:将处于对数生长期的人肾小球系膜细胞接种于12孔板中,给予相应的处理后,用不含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化后制成单细胞悬液,按试剂盒说明书操作,依次加人500μl Binding Buffer、5μl Annexin V-FITC,2μl PI,混匀,室温下避光反应15min后,流式细胞仪检测细胞凋亡率。