将冻存的人卵巢癌细胞株（SKOV3，CAOV3，A2780）和对照细胞株（HOSEPiCs）进行复苏，使用含10%胎牛血清和100 U/mL青链霉素的DMEM培养基，将细胞置于37ºC并含有5% CO₂的细胞培养箱中培养。每天观察细胞状态并及时传代。ITLN1的过表达载体和对照组分别命名为ITLN1与vector（均购于广州Ribobio公司）。使用Lipofectamine 3000按照说明书进行转染。

1.2.4 蛋白质印记

使用RIPA缓冲液对细胞进行裂解，使用BCA试剂盒检测蛋白质含量。随后，用12%的SDS-PAGE凝胶进行电泳分离蛋白。将分离的蛋白条带转移到PVDF膜上。封闭处理后，用一抗在4℃孵育过夜。抗体如下：anti-ITLN1（ab252926；1:1000），anti-p-PI3K（#4228；1:600），anti-PI3K（ab32089；1:1000），anti-p-Akt（ab18206；1:1000），anti-Akt（ab8805；1:1000），anti-β-actin（ab179467；1:1000）。然后，用二抗山羊抗兔IgG（ab205718；1:2500）孵育1 h。所有抗体均购于美国Abcam公司。最后，使用ECL-Plus试剂观察蛋白印迹。