经ATRA和/或索拉非尼处理后不同时间收集2×10⁶个细胞，经PBS清洗后，重悬于100 μL RIPA裂解液中。蛋白提取物经DC Protein Assay试剂盒定量后，于－20 ℃分装保存。取20~50 μg蛋白，经8% SDS-PAGE电泳分离后，依次进行转膜、5%脱脂奶粉或5%牛血清白蛋白封闭，一抗、二抗孵育，ECL试剂显色，自显影于胶片。p-RAF、p-MEK1/2和p-ERK1/2反应后的膜，经蛋白印迹膜再生液处理后，5%牛血清白蛋白封闭，分别和抗RAF、MEK1/2和ERK1/2抗体、二抗孵育，ECL试剂显色，自显影于胶片。