3）实时定量PCR扩增 PCR引物由大连宝生物生物公司合成，引物序列见表2, 反应在96孔PCR板中进行。选取Y染色体上特异性序列DYS14基因作为男性胎儿标志物， 采用PCR进行扩增，同时标记荧光，以(3-globin基因作为阳性内对照，蒸馏水空白对照。 在冰上配制20ul体系PCR反应液表3。根据引物的Tm平均值上下波动、.3〜4°C，作温度梯 度，根据扩增曲线和熔解曲线，确定目的和内参基因的相同最适反应温度。PCR扩增循 环参数的设置见表3,每个样本基因均做复孔。检测仪器自动计算出CT值（扩增产物的 荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环数)。为减少外源性污染可能，所有操作均由同一个女性完成。