结直肠癌患者和健康对照人群全血DNA通过血液基因组DNA提取试剂盒进行提取，详细步骤见说明书（天根，DP348）。提取的DNA经过亚硫酸氢盐处理，详细步骤见说明书（ZYMO Research，D5005)，回收处理后的DNA作为模板扩增MSTN基因启动子区的CpG岛，反应体系为：EpiTaq酶0.25μL，10×Epi Buffer5μL，Mg2+5μL，dNTP Mixture(2.5mM)6μL，模板DNA1μL，上下游引物各1μL，反应条件如下：95℃ 30sec, 58℃ 30sec, 68℃ 30s(35 cycles) →68℃ 7min→4℃。以第一轮扩增产物为模板进行第二轮PCR扩增，反应体系及反应条件同上。获得的PCR产物通过琼脂糖凝胶回收试剂盒回收，连接（Solution I 5μL+目的片段4μL+pMD-19T vector 1μL 16℃过夜连接）到pMD-19T vector上，转化E.coli DH5α感受态细胞涂平板过夜，挑菌并摇菌，最后将阳性菌液送去测序。将测序序列与基因组原序列比对，用QUMA(Quantification tool for Methylation Analysis）在线软件作图，分析MSTN基因启动子区和基因体区的甲基化程度。