取60 mL牛血清，搅拌滴加醋酸钠溶液，调节pH至4.5；滴加正辛酸溶液，常温搅拌均匀后，4 ℃放置1 h；12000 r/min离心30 min，上清经滤纸过滤后，加入1/10体积的10×PBS，调节pH至7.0，搅拌滴加饱和硫酸铵溶液至50%，4 ℃放置2 h，12000 r/min离心30 min，去上清；PBS重悬离心后的沉淀物，4 ℃透析，每2 h更换一次透析液，直至完全去除氨离子；检测蛋白浓度，冻存，备用。

2.2兔抗牛IgG抗体的制备

用制备好的牛IgG抗原每2周免疫1次大耳白兔，经4次免疫后，取耳缘静脉血进行酶联免疫吸附实验检测抗体效价，效价达到10万后停止免疫，进行颈动脉采血。将兔血经5000 r/min，4 ℃离心15 min后收集上层血清。提取抗体，提取方法同牛IgG提取方法。测定抗体效价及浓度，冻存，备用。