猪圆环病毒2型杆状病毒的构建及在Hi5细胞中高效表达

 

摘  要：本研究克隆PCV2 SY株ORF2基因序列，对N端细胞核定位信号（nuclear localization signal；NLS）区域11个氨基酸进行点突变，突变后的ORF2基因先后克隆至pUC57和转移载体pBacF，经PCR及酶切鉴定正确后, 转染 sf9细胞获得重组杆状病毒，重组杆状病毒在Hi5细胞进行感染及cap蛋白表达。SDS-PAGE 和 Western blotting 鉴定结果表明，在Hi5细胞28kDa处有一可被 PCV2阳性血清识别的外源cap蛋白高效表达； Hi5细胞中的cap蛋白产量比sf9细胞中产量高，而且比较稳定，均达到350至550μg/ml；同时经蛋白测序得出，上述蛋白序列与NCBI数据库PCV2病毒cap序列配对率达93.59%以上。

关键词：猪圆环病毒2型；重组杆状病毒；Hi5细胞；高效表达