响应面法优化五味子多糖的酶法提取工艺
更新日期:2017-12-19     来源:中国实验方剂学杂志   浏览次数:230
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(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实,始载于《神农本草经》,列为上品。五味子多糖是从五味子中提炼出来的混合物,其药理作用的研究涉及消化系统、心血管系统、中枢神经系统以及抗氧化、抗衰老、抗肿瘤等多方面 [1-3]。
五味子多糖的提取方法主要有水提法、微波提取法、超声提取法、酶提法等。鉴于对工业生产的需要,水提法比较实用,但是提取率相对较低,因此可考虑酶法提取多糖。本文引入目前国际上常用的试验设计方法响应面-中心组合法,对五味子多糖提取工艺进行优化,旨在为五味子多糖的开发和利用提供科学依据。
1材料与方法  
1.1材料与试剂
无水乙醇、95%的乙醇、丙酮、乙醚、浓硫酸、重蒸酚、柠檬酸、柠檬酸钠均为分析纯:天津登科化学试剂科技有限公司;无水葡萄糖标品(批号:20140324)、纤维素酶(活力50U/mg,批号:20140721):成都普菲德生物技术有限公司;五味子购于辽宁,经过河南中医学院董诚明教授鉴定为北五味子的干燥果实。
1.2仪器与设备
T6新世纪紫外可见分光光度计:北京普析通用仪器有限责任公司;SHA-C型水浴振荡器:巩义英峪予华仪器设备有限公司;5439R台式高速冷冻离心机:德国Eppendorf公司。
2方法与结果
2.1五味子多糖的含量测定
2.1.1对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的无水葡萄糖对照品9.63mg,加蒸馏水定容至10ml的棕色容量瓶中作为对照品储备液。
多糖提取率%=多糖质量/药材质量×100
2.1.2 供试品溶液的制备
精密称取5g过三号筛的五味子粉末于500ml的锥形瓶中,加入一定量的纤维素酶,再加入200ml的PH为一定值的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液,在一定温度的水浴振荡器中(100 r•min-1)提取0.5小时。锥形瓶取出后在水浴锅中灭酶20min。离心(3500 r•min-1)除去药渣,提取液在水浴锅上浓缩至20ml,放至室温后加入95%的乙醇至体积分数达到80%。放置过夜,取沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚各洗涤3次。减压干燥得五味子粗多糖。
2.1.3 标准曲线的绘制
精密量取对照品储备液1ml,0.8ml,0.6ml,0.4ml,0.2ml,0.1ml分别置于10ml容量瓶中,加蒸馏水至刻度,得到不同浓度的标品溶液。各取1ml置具塞试管中,空白组用蒸馏水代替,再加入5%的重蒸酚溶液1ml,摇匀,迅速加入5ml浓硫酸,摇匀。40℃恒温水浴30min,取出后冰水浴5mim,于490nm处测吸光度。以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标绘制标准曲线,得回归方程为:y=0.0087x 相关系数R2 =0.9991,在20.66~96.3ug•ml-1范围内葡萄糖含量与吸光度呈良好的线性关系,可用于多糖含量的准确分析。