痤疮是一种累积毛囊皮脂腺的慢性炎症性皮肤病，目前多认为与雄激素、皮脂分泌、痤疮丙酸杆菌增殖、毛囊皮脂腺导管的异常角化、心理及遗传，以及IL-1、TNF-α等细胞因子，P物质有关[1][2][3]。红霉素对痤疮丙酸杆菌高度敏感，是目前临床治疗痤疮的首选药物[4]，但具有一定的副作用，因此迫切需要寻找安全有效的药物。中药具有疗效确切，副作用小、价格低廉等作用，为治疗痤疮安全有效药物的开发对象。桉叶油是桉树叶油腺细胞分泌的芳香精油，具有抗菌、抗炎、杀虫、促渗透、抗氧化等生理活性[5]，许多美容医院发现桉叶油对痤疮患者能起到较好的治疗效果。但药用桉叶油要求高，英国药典规定，药用桉叶油桉叶油素的含量必须大于等于70%。蓝桉叶油为我国的主要桉叶油种类，具有产量多，桉叶油素含量高（大于等于80%）等特点。因此我们以蓝桉叶油为研究对象，通过研究不同助溶剂（95%乙醇及丙酮）作用下蓝桉叶油对痤疮主要致病菌（痤疮丙酸杆菌）的抑制作用及最低抑菌浓度，为桉叶油对痤疮的治疗提供更多的理论依据，为痤疮的治疗开拓更广的途径，同时也为桉叶油资源的开发利用提供更广平台。
一、实验材料与方法
1、材料
1.1 受试菌株 痤疮丙酸杆菌 (propionibacterium acnes) 标准菌株ATCC6919由广东省微生物研究所菌种保藏中心提供。
1.2 试验药物 80%桉叶油（桉叶素含量大于等于80%）购自德信行（珠海）香精香料有限公司，批号140923-1#。红霉素购自solarbio公司，批号325B043。
1.3仪器与试剂 SW-C J-1BU垂直流超净工作台，苏州安泰空气技术有限公司；DZF-6090真空干燥箱，上海一恒科技有限公司；PL2 0 2-S精密电子天平，梅特勒-托利多仪器有限公司；GNP-9270型隔水式恒温培养箱，上海三发科学仪器有限公司等；试管、平板、吸管、锥形瓶等；疱肉培养基基础，北京陆桥技术有限责任公司；95%乙醇；丙酮等。
2、实验方法
2.1培养基制备 称取32.0g疱肉培养基基础，放入烧杯中，加入1L蒸馏水中，煮沸制成疱肉培养基基础液；同时按照2.5%的比例称取一定量的琼脂条放入其中，加热煮沸至完全溶解，制成固体培养基；取中号试管加入疱肉牛肉粒，倒入疱肉培养基基础液，没过牛肉粒2cm，配成液体培养基，放入121℃高压灭菌锅中灭菌15min制备成固体培养基及液体培养基备用。
2.2 菌种的活化 将安瓿管尖端放在火焰上加热；滴少量无菌水至加热处使之破裂；用镊子轻轻敲下安瓿管顶端；用镊子取出小管内的脱脂棉，将小管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作；用无菌吸管吸取0.5ml液体培养基滴入小管内；轻轻震荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状，吸取全部菌体悬液移植在斜面及平板培养基上，并在37℃厌氧环境中培养48小时，将菌种两次继代培养后使用。
2.3桉叶油的抑菌实验
2.3.1 药液及菌悬液的制备 将浓度为80%的桉叶油用95%乙醇及丙酮采用两倍稀释的办法稀释为40%、20%、10%、5%、2.5%、1.25%、0.625%几个浓度；称取一定量的红霉素，将其用灭菌蒸馏水稀释为16ug/ml备用；取痤疮丙酸杆菌菌落，采用比浊仪，使用灭菌生理盐水将菌落调整为0.5个麦氏比浊单位(约为1.0×10 cfu／mL)菌悬液备用。
2.3.2平板的制备 将培养基加热溶解，待其温度为55℃时，每个平板中倒入2/3的固体培养基，待其冷却固定后备用。
2.3.3 桉叶油的抑菌作用 取四组制备好的平板，每组平行做三个平板，每个平板中用吸管滴入0.1ml的菌悬液，用涂布棒将菌悬液涂布均匀，待其干燥2分钟后。第一组平板中放入一个牛津杯，杯中放入浓度为80%的桉叶油；第二组平板中放入一个牛津杯，杯中放入浓度为40%桉叶油乙醇溶液；第三组平板中放入一个牛津杯，杯中放入浓度为40%桉叶油丙酮溶液；第四组平板中放入四个牛津杯，杯中分别放入浓度为16ug/ml的红霉素、95%乙醇、丙酮、灭菌蒸馏水，以上药液每个牛津杯中加入200ul，放入37℃厌氧环境中培养48小时，观察抑菌圈的情况。
2.3.4 桉叶油的最低抑菌浓度 取桉叶油乙醇及丙酮溶液20%、10%、5%、2.5%、1.25%、0.625%几个浓度，将桉叶油与液体培养基充分混合，使最终浓度为5%、2.5%、1.25%、0.625%、0.3125%、0.15625%，分别设为1-6号管，每个试管中加入0.1ml的菌悬液，同时设置丙酮及95%乙醇、培养基+菌悬液、培养基对照，分别标为7-9号管 ，放入37℃厌氧环境中培养48小时观察细菌生长情况，以完全没有细菌生长的精油浓度为最小抑菌浓度。
二、实验结果与分析
1、桉叶油对痤疮丙酸杆菌的抑菌圈测定
桉叶油对痤疮丙酸杆菌的抑菌圈测定见表1
表1桉叶油对痤疮丙酸杆菌的抑菌圈测定

药物 抑菌圈直径（mm）

80%桉叶油 完全抑菌
40%桉叶油乙醇溶液 完全抑菌
40%桉叶油丙酮溶液 完全抑菌
红霉素（16ug/ml） 29.44
95%乙醇 无抑菌圈
丙酮 无抑菌圈
灭菌蒸馏水 无抑菌圈

由表1可知，桉叶油对痤疮丙酸杆菌能起到较好的抑菌效果，纯桉叶油（80%浓度）、桉叶油乙醇溶液（40%浓度）及桉叶油丙酮溶液（40%浓度）对痤疮丙酸杆菌能表现出完全抑菌作用；阳性对照药（16ug/ml红霉素）对痤疮丙酸杆菌平均抑菌圈的大小为29.44mm；助溶剂95%乙醇及丙酮对痤疮杆菌无抑菌作用；空白对照（蒸馏水）对痤疮丙酸杆菌无抑菌作用。
2、桉叶油对痤疮丙酸杆菌的最低抑菌浓度测定
桉叶油对痤疮丙酸杆菌的最低抑菌浓度测定见表2
表2桉叶油对痤疮丙酸杆菌的最低抑菌浓度测定

组别 无菌生长管 MIC（%）

桉叶油乙醇组 1-3,7,9 1.25
桉叶油丙酮组 1-4,7,9 0.625

由表2可知道，桉叶油对痤疮丙酸杆菌有抑菌作用，助溶剂95%乙醇及丙酮对痤疮丙酸杆菌无抑菌作用，但是对痤疮丙酸杆菌的最低抑菌作用有一定的影响，当以丙酮为助溶剂时，桉叶油的最低抑菌浓度为0.625%，95%乙醇为助溶剂时，最低抑菌浓度为1.25%，以丙酮为助溶剂时其最低抑菌浓度较以95%乙醇为助溶剂时低。
三、讨论
痤疮是发生于毛囊皮脂腺的慢性炎性皮肤病，具有一定的损容性，给患者的身体带来一定的损伤，心理造成一定的压力。目前多认为与雄激素、皮脂腺分泌增加、毛囊皮脂腺开口处过度角化和痤疮丙酸杆菌感染四大因素有关。雄激素水平增高可使皮脂腺分泌增大及皮脂腺分泌增加，皮脂为毛囊内寄生菌（痤疮丙酸杆菌、卵圆形糠秕孢子丝菌、表皮葡萄菌等）的生长提供物质基础，痤疮丙酸杆菌可水解皮脂中的甘油三酯，产生的游离脂肪酸可刺激毛囊皮脂腺开口处上皮增生及角化过度，后者使皮脂腺分泌通道受阻、排泄不畅，当皮脂、角质团块等淤积在毛囊口时即形成粉刺，富有刺激性的游离脂肪酸可刺激毛囊引起炎症性皮损。另外由痤疮丙酸杆菌产生的一些低分子多肽可趋化中性粒细胞，后者产生的水解酶也可使毛囊壁损伤破裂，上述各种毛囊内容物溢入真皮引起毛囊周围程度不等的深部炎症，从而从炎性丘疹到囊肿等一系列临床表现。由上可知，痤疮丙酸杆菌在痤疮的发病及炎症形成中起着重要作用。目前痤疮的西医治疗多采用维生素类、激素类、抗生素及抗菌药物，这些药物虽然就有一定的治疗作用，但具有一定的副作用，因此，寻找安全有效的治疗药物很重要[6]。
桉叶油是桉树叶油腺细胞分泌的芳香精油，具有有较强的抗菌作用，对多种细菌、真菌及霉菌等表现出一定的抗菌活性。近年来桉叶油的抗菌作用研究越来越多，倪木兰等研究表明桉叶油对革兰阳性菌有抑菌作用[7],但桉叶油的抑菌作用多集中在对金黄色葡萄球菌方面，对痤疮的主要致病菌痤疮丙酸杆菌的研究比较少。因此，进一步研究桉叶油对痤疮丙酸杆菌的抑制作用，将为桉叶油对痤疮的治疗提供更多的理论基础依据，同时也将为痤疮的治疗提供更有效的方法。