新疆维药居多，主要以医院制剂的形式发展.目前医院制剂普遍存在的质量标准检测方法落后、质量标准缺项严重的问题［1］。按《中国药典》2010年版规定［2］，药品进行微生物限度检查时必须对方法学进行验证，本文参考相关文献［3-6］，根据制剂中成分的抑菌作用强度不同，采用了常规法、培养基稀释法、薄膜过滤法制备供试品溶液，建立了15种医院制剂相应的微生物限度检测方法，经方法验证试验证实该方法简便易行，消除抑菌作用有效。
1.仪器与材料
1.1仪器
高压蒸汽灭菌器，LDZH-150KBS，上海申安医疗器械厂；超净工作台，SW-CJ-2D,苏州净化设备有限公司；生物安全柜，BH3-1300，苏州安泰空气技术有限公司；HTY-III型集菌仪 ,杭州泰林医疗器械厂;一次性薄膜过滤器（规格FC502;批号20150814）,杭州泰林生物技术设备有限公司。
1.2样品
复方比黑马尔江胶囊（批号：20141201，20141202）；艾合米尔散（批号：20150101，20150102） ；黑种草子油（批号：20141201，20141202）；依提尔菲力开西尼孜丸（批号：20150201，20150202）；小茴香露剂（批号：20141201，20141202）均有新疆喀什地区叶城县维吾尔医医院提供.加瓦日西库木尼蜜膏（批号：20141101，20141201）；驱白马日白热斯丸 （批号：20140601，20140801）；复方安吉杷尔糖浆（批号：20140901，20141101）；玛里抗瘤丸（批号：20140701，20141101）；加瓦日西昆都尔蜜膏（批号：20141101，20141201）均有新疆喀什地区莎车县维吾尔医医院提供。止痛苏润江片（批号：20150101，20150102）；复方合牙日仙拜尔片（批号：20150101，20150202）；止咳祖帕片（批号：20150101，20150102）；那尼花米西克片（批号：20150101，20150102）；清血吾血白片（批号：20150101，20150102） 均有新疆和田地区维吾尔医医院提供
1.3培养基
营养琼脂培养基 （批号：110105）、玫瑰红钠琼脂培养基（批号：1012152）、营养肉汤培养基 （批号：101213）、胆盐乳糖增菌液 批号：（1211222）、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液（批号：1404242）、乳糖胆盐发酵培养基（ 批号：101108），营养肉汤培养基（批号：141103）均由北京三药科技开发公司
1.4菌株
金黄色葡萄球菌 [ CMCC（B）26003 ]，大肠埃希菌 [CMCC（B）44102 ] ，枯草芽孢杆菌[ CMCC（B）63501 ] ，铜绿假单孢菌 [CMCC（B）10104 ] ，白色念珠菌 [ CMCC（B）98001 ] ， 黑曲霉[ CMCC（F）98003 ] ，乙型副伤寒沙门菌[CMCC50094]均由中国食品药品检定研究院提供。
2 方法与结果：
2.1菌液的制备：
2.1.1取经35℃ 培养18-24小时的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌肉汤培养物1ml，加入9ml0.9%氯化钠溶液中，10倍稀释制成50-100cfu/ml，备用。
2.1.2取经25℃培养24-48小时的白色念珠菌改良马丁液体培养物1ml，加入9ml0.9%氯化钠溶液中，10倍稀释为50-100cfu/ml，备用。
2.1.3取经25℃培养1周的黑曲霉斜面培养物，加3ml0.9%灭菌氯化钠洗下霉菌孢子，用带有棉花的吸管取出菌液，用0.9%灭菌氯化钠溶液10倍稀释制成50-100cfu/ml，备用。
2.2供试品溶液的制备
2.2.1口服液体供试品：取样品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，制成1:10的供试液。
2.2.2口服固体供试品：取样品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，制成1:10的供试液。
2.2.3外用液体供试品：取样品10ml，加含2%吐温-80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，制成1:10的供试液。
2.2.4外用固体供试品：取样品10g，加含2%吐温-80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，制成1:10的供试液。
2.3验证方法
2.3.1细菌、霉菌和酵母菌计数法回收率的测定。
2.3.1.1试验组：平皿法：取1ml1：10供试品溶液和50～100cfu菌液注入1个平皿中，迅速倒入15～20ml45℃左右的琼脂培养基，每个菌株制备2个平皿。细菌在35℃培养箱中培养3天，霉菌在25℃培养箱中培养5天，计数，取平均值。
培养基稀释法：取0.2ml/皿1：10供试品溶液和50～100cfu菌液注入1个平皿中，照常规法进行试验。
薄膜过滤法：取1：10供试液1ml加入薄膜过滤器中，冲洗液100ml/膜，在最后一次冲洗液中加入50～100cfu试验菌，后取膜贴于琼脂平板，按薄膜过滤法测定其菌数。
2.3.1.2菌液组：测定所加的试验菌数。
2.3.1.3供试品对照组：取规定量供试品溶液，按菌落计数方法测定供试品本底菌数。
2.3.1.4稀释剂对照组：取相应的稀释液代替供试品溶液，加入试验菌，按试验组方法测定其菌落数。
回收率（%）=（试验组菌数-供试品组菌数）/菌液组菌数×100%
2.3.2 控制菌检验方法验证
2.3.2.1 大肠埃希菌：取供试液10ml及10～100cfu大肠埃希菌加至100ml胆盐乳糖增菌液中，培养18～24小时后，按《中国药典》2010年版控制菌检验方法检查。
2.3.2.2 大肠菌群：取供试液1.0ml及10～100cfu大肠埃希菌加至10ml胆盐乳糖发酵培养基中，培养18～24小时后，按《中国药典》2010年版控制菌检验方法检查。
2.3.2.3 沙门菌：取供试液10ml及10～100cfu金黄色葡萄球菌加至200ml营养肉汤培养基中，培养18～24小时后，按《中国药典》2010年版控制菌检验方法检查。
2.3.2.4金黄色葡萄球菌：取供试液10ml及10～100cfu金黄色葡萄球菌加至100ml营养肉汤培养基中，培养18～24小时后，按《中国药典》2010年版控制菌检验方法检查。
2.3.2.5铜绿假单孢菌：取供试液10ml及10～100cfu铜绿假单孢菌加至100ml胆盐乳糖增菌液培养基中，培养18～24小时后，按《中国药典》2010年版控制菌检验方法检查。
2.4 结果
2.4.1 常规法测定3家医院15种供试品的回收率，进行3次独立平行试验，稀释剂对照组回收率均高于70%，试验组结果见表1.复方比黑马尔江胶囊、黑种草子油、依提尔菲力开西尼孜丸、小茴香露剂、复方安吉杷尔糖浆、止咳祖帕片、清血吾血白片采用常规法5种试验菌的回收率均高于70%，证明无抑菌现象。加瓦日西库木尼蜜膏、驱白马日白热斯丸、玛
里抗瘤丸、加瓦日西昆都尔蜜膏、止痛苏润江片等5种对枯草芽孢杆菌有明显抑制作用，其中加瓦日西昆都尔蜜膏采用薄膜过滤法（100ml/膜）可消除其抑菌作用，其他4种采用培养基稀释法（0.2ml/皿）可消除其抑菌作用。艾合米尔散、复方合牙日仙拜尔片、那尼花米西克片对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌均有明显抑制作用，采用培养基稀释法（0.2ml/皿）可消除其抑菌作用。