1.2主要试剂及仪器

打击仪（宏峰，中国），纯净水净化器（成都优普科技有限公司，中国），微量计量器（宏峰，中国），氯化钠注射液（四川科伦药业股份有限公司，中国）；RHO一抗（北京博奥森生物技术有限公司，中国），通用SP试剂盒（SP-9000 中衫金桥，中国）Trizol裂解液(上海源迈生物，中国)，氯仿（重庆川工化工，中国），DEPC水(Biosharp，中国)，乙醇（成都科隆化学品有限公司，中国），逆转录试剂盒(赛默飞世尔科技有限公司，中国)，TE缓冲液（北京索莱宝生物科技有限公司，中国），异丙醇（成都科隆化学品有限公司，中国），逆转录试剂盒(南京维诺赞生物科技有限公司，中国)，荧光定量PCR mix（北京优胜生物科技有限公司，中国）。

1.3慢病毒制备

将AQP-4siRNA序列（中国广州，GeneCopoeia）克隆到RFP(Red Fluorescent Protein,红色荧光蛋白）标记的载体中，再将RFP标记的载体（5 ug）和慢病毒包装质粒（1 ul，中国广州，GeneCopoeia）共转染到293细胞生成慢病毒质粒（AQP-4-Si-LV）。静置48h后分离上清液，将上清液置于0.45 um，醋酸纤维素过滤器中过滤，去掉滤液，再取5 ml离心（3500 r/min，25 min），去掉上清液再将沉淀重新溶解于500 ul PBS中，将制备好的慢病毒质粒置于-80 ℃冻存。

1.4慢病毒转染

使用3.6%水合氯醛对Vector组和AQP-4RNAi组大鼠进行腹腔麻醉后将大鼠置于俯卧位固定，在背部T9-T11周围依次切开并分离皮肤，筋膜和肌肉，剥除T9的棘突和椎板，暴露T10节段脊髓，使用脑立体定位仪（DW-5，成都泰盟）在脊髓拟打击点两侧进针3-5 um，注射5 ul慢病毒质粒，进针角度与水平方向呈30°。慢病毒转染完毕后依次缝合肌肉、筋膜、皮肤，对大鼠施行消毒以及抗感染处理后独笼饲养，并保证环境干燥以及温度适宜。