1.2 动物
由西安交通大学医学院实验动物中心提供雄性昆明种小鼠(质量合格证号:61001700000932),体重18-22 g,选用能够正常游泳小鼠40只用于本研究。生产许可证号:SCXK(陕)2012-003,SPF级。实验动物房为屏障系统,使用许可证号为SYXK(陕)2012-006,温度20-25℃,相对湿度45%-65%。
1.3 剂量选择及配置实验
设1.05 g/kg.bw、0.70 g/kg.bw、0.35 g/kg.bw三个剂量组(分别相当于人体推荐用量30、20、10倍),另设(蒸馏水)对照组。样品配制:称取1.05 g、0.70 g、0.35 g样品,分别加蒸馏水至20 mL,混合均匀。
1.4 仪器和试剂
1.4.1 主要仪器、耗材 游泳箱、JD500-2电子天平、秒表、铅皮、UV-7504紫外可见分光光度计、深圳迈瑞BS-420全自动生化分析仪、10mL具塞试管、温度计,恒温水浴箱、离心机、旋涡震荡器、手术器械、微量加样器、吸管、刻度离心管等。
1.4.2 试剂 乳酸检测试剂盒,糖原检测试剂盒(南京建成赛浩科技有限公司生产)、血清尿素生化分析试剂(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产)等。
1.5 试验方法
将经预游泳后选姿势正确雄小鼠160只,随机分四个实验组,每个实验组40只小鼠,各实验组均设三个剂量组和阴性对照组,实验动物数均为10只,实验一组进行负重游泳实验,实验二组进行血清尿素实验,实验三组进行肝糖原检测实验,实验四组进行血乳酸检测实验。按上述剂量每天经口给予相应剂量样品一次,灌胃体积为20 mL/kg.bw,阴性对照组给予等容量蒸馏水,连续灌胃30天。然后分别进行各项指标的测定。
1.5.1 小鼠负重游泳实验 于末次给予样品30 min后,将小鼠置于游泳箱中游泳,水深35 cm,水温25℃,鼠尾根部负荷5%体重的铅皮,记录各组小鼠自游泳开始至力竭停止游泳的时间,作为小鼠负重游泳时间,各剂量组结果与对照组比较进行方差分析。
1.5.2 小鼠血清尿素测定 于末次给予样品30 min后,在温度为30℃的水中不负重游泳90分钟,运动后休息60 min,拔眼球采血0.5 mL,200 r/min离心15 min,分离血清后用全自动生化分析仪进行血清尿素测定。