1.1 样品的制备
将樱桃果实洗净,去梗去核,用榨汁机破碎,根据实验室前期的研究,加70%乙醇(95%乙醇配制而成),加热回流提取,弃去药渣,合并提取液,减压蒸馏,回收乙醇,干燥浸膏,经测定其总黄酮含量为0.2091mg/mL,备用。
1.2 总黄酮含量测定
精密吸取芦丁对照溶品液(自制,浓度为0.193 mg/mL)0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL、1.4 mL,分别置于5mL试管中,加70%乙醇补足至2 mL,依次精密加入5%亚硝酸钠溶液0.3 mL,摇匀,静置6 min,然后加入10%硝酸铝溶液0.3 mL,摇匀,静置6min;最后加入4%氢氧化钠溶液2 mL,摇匀静置10min后按照紫外-可见分光光度法[《中国药典》(2010年版)附录VA],在500 nm波长处测定其吸光度A,以吸光度(A)为纵坐标(y),芦丁质量(m)为横坐标(x),绘制标准曲线,得回归方程为:y = 2.760x - 0.033,(r=0.998),表明芦丁在0.0424~0.2688mg/mL范围内线性关系良好。取供试品溶液,采用上述方法配制后,测定其吸光度,由标准曲线计算总黄酮含量。
1.3 大孔树脂对樱桃果实总黄酮的初步纯化实验
选取6种不同的大孔树脂,按照说明进行预处理[10],在相同条件下进行理想大孔树脂选择,并探究最佳吸附条件[11-15]。
1.3.1 大孔树脂对樱桃果实黄酮的静态吸附,解析实验
1.4.1.1 分别称取已处理好的6种大孔树脂(AB-8、FL-3、D900、HPD-600、ADS-17、HP-20)各2.0 g于三角瓶中,加入30 mL一定浓度的樱桃果实总黄酮提取液,于恒温振荡器中(室温,120 r/min)静态吸附24 h,每间隔一定时间检测上清液黄酮含量,由公式(1)、(2)计算吸附量和吸附率。将静态吸附24 h后的各树脂进行过滤,用一定量的蒸馏水清洗树脂,再过滤,将其转入三角瓶中,加入40 mL 70 %的乙醇溶液,于恒温振荡器中(室温,120 r/min)静态解析24 h,每间隔一定时间检测上清液黄酮含量,由公式(3)计算解析率。对6种树脂的吸附率和解析率进行比较,选取最佳作为理想树脂,并探究其吸附的理想条件。