1.3.1 总黄酮含量的测定
根据Aktumsek等人的研究[11],通过分光光度法测定提取物中总黄酮的含量。以芦丁为标准品,提取物中总黄酮的含量以每克提取物中的毫克芦丁当量(mg RE/g)表示。
1.3.2 UPLC测定
采用Thermo Scientific LTQXL色谱仪(Thermo Scientific, USA)进行UPLC分析,该色谱仪配备了二元泵、自动进样器、色谱柱加热器、溶剂输送系统、二极管阵列检测器(DAD-270 nm)和数据处理系统。采用C18色谱柱(100 mm×2.1 mm),粒度为1.9μm(美国Thermo Scientific公司)进行黄酮类化合物的分析。黄酮类化合物采用乙腈(B)和0.1%甲酸在超纯水(A)中的流动相进行梯度洗脱分离。梯度程序如下。0-12.5min,90%A-10%A;12.5-13min,10%A;13-13.5min,10%A-90%A;13.5-15min,90%A。流速为0.2mL/min,进样量为5μL,运行时间为15min,柱温为25℃,监测波长为270nm。每个重复样品的色谱分析一式三份。
1.3.3 抗氧化活性的测定
1.3.3.1 DPPH法测定抗氧化活性
采用Yen等人的方法[12-13],在517nm处测量吸光度,抗氧化活性以Trolox当量(umol /g Trolox)表示。
1.3.3.2 ABTS法测定抗氧化活性
采用Re等人的方法测定提取物的清除活性[14]。将样品置于暗室中,在732nm波长下放置2小时,测量吸光度。抗氧化活性以Trolox当量(umol/g Trolox)表示。
1.3.3.3 CUPRAC法测定抗氧化活性
采用Apak等人的方法测定[15]。在室温保持30分钟后,在450nm波长下测量吸光度。结果以umol/g Trolox表示。
1.3.3.4 FRAP法测定抗氧化活性
采用Wojdylo等人的方法测量593 nm处的吸光度[16]。结果以umol/g Trolox表示。
1.3.3.5 总抗氧化能力的测定
采用Prieto等人的方法测量695nm处的吸光度[17]。结果以umol/g Trolox表示。
1.3.4 抑菌活性的测定
1.3.4.1 供试细菌
大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌(Salmonella)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和枯草杆菌(Bacillus subtilis)