1.4.3 Plackett-Burman试验设计
在单因素初步实验的基础上,利用Minitab 17.0软件进行Plackett-Burman试验设计,以枣酒的总酯含量为响应值,对影响枣酒总酯含量的11种氨基酸(天冬氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸、精氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、丝氨酸分别代表)进行筛选和6种微量元素、5种生长因子硫酸镁、硫酸亚铁、氯化钙、硫酸铜、氯化锌、碘化钾6种微量元素和肌醇、硫胺素、生物素、泛酸、叶酸5种生长因子)进行筛选,每个因素取1和-1两个高、低水平,每个实验重复3次,取平均值为实验结果。比较考察因素的水平差异与整体差异来实现因素显著性的筛选[15]。通过最陡爬坡实验,得到各重要因素的可能区域中心点[16]。
1.4.4 Box-Behnken试验设计
根据Plackett-Burman选取影响枣酒发酵总酯含量的显著影响因素,利用响应面法(Box-Behnken试验设计)对影响枣酒发酵总酯含量的因素参数进行进一步优化,求出响应值最大时各营养素的最优水平。
1.5 发酵前后枣酒香气成分的测定
1.5.1样品处理
取5ml于顶空进样瓶中,加入1g氯化钠用聚四氟乙烯隔垫密封,进样瓶在40℃条件下平衡30 min,将萃取针插入进样瓶顶空吸附30 min,然后进行热解吸5min,进行GC-MS分析。
1.5.2气相色谱与质谱条件[17-19]
色谱柱:CP-WAX57石英毛细管柱(50×0.25mm×0.20um);升温程序:柱温35℃,保持5min,然后以3.5℃/min升温至200℃,保持5min,最后以15℃/min升温至250℃,保持5min;载气(He)流速1ml/min,压力7.6522psi;进样量1uL;分流比50:1。
电子电离离子源;电子能量70eV,质量扫描范围m/z 35-450,0.2scans/s;传输线温度280℃,离子源温度280℃。
1.5.3定性定量分析
数据采集及分析由NIST MS search 2.0完成,并通过CAS号、配比度和已有的相关文献资料来确定风味物质。
1.6 枣酒的感官评定[20-21]
采用百分制法,挑选20名(10名男性,10名女性)有相关经验并经过培训感官评定人员组成感官评定小组,从色泽(20分,酒体无明显悬浮物,呈枣红色,澄清透明,有光泽)、香气(30分,具有优雅、愉悦、纯正的枣香和酒香)、口感(30分,酒体丰满、醇厚协调)和典型性(20分,风格独特,完美典型)4个方面对各个酒样进行感官评定,各项平均分之和为最终感官评分值。