1.2.1动物造模及分组
实验选用16只6周龄雄性成年wistar大鼠（体重180～200g）。他们被安置在标准条件下相同室温和空气湿度的动物实验室（福建省医学科学研究所动物实验室）。食物和水可以随意使用。将大鼠随机分为两组，阿霉素组（DG，n=8）和正常对照组（NG，n=8）。DG组每周两次腹腔注射阿霉素（1mg/kg），NG组注射等量生理盐水（1ml/kg）。两组共注射8周后再继续饲养3周。第11周将所有动物称重并用10%水合氯醛（0.3ml/100g）麻醉处死。迅速取出心脏，分离心室，立即在液氮中冷冻，并在-80°C下储存直到检测开始。
1.2.2 ELISA法测定NT-proBNP的值
处死大鼠时抽取2毫升腹主动脉血液,在室温下静置10分钟,然后3000 r / min离心20分钟。仔细收集上清液，根据说明书步骤，采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定NT-proBNP。
1.2.3 ELISA法测定NO值
处死大鼠时抽取2毫升腹主动脉血液3000 r/min离心10 min，取上清，根据说明书步骤，在550 nm处测定吸光度，采用ELISA法测定血浆NO水平。
1.2.4 组织学观察心室心肌
制备心室标本进行组织学分析。取大鼠心室肌用10%甲醛固定，石蜡包埋，切片，苏木精-伊红(HE)染色心肌细胞，进行光学显微镜观察。
1.2.5 RNA分离和实时荧光定量PCR（QRT-PCR）检测大鼠心室肌β3-AR、PI3K和Akt的基因表达水平
取心室组织100mg匀浆后中，用Trizol试剂提取总RNA。应用NanoDrop ND-1000分光光度计(NanoDrop Technologies, Wilmington, DE)测量RNA的浓度。并通过Bio-Rad系统(CFX Connect, USA)进行QRT-PCR测定。本研究使用的引物序列为尚亚科技公司合成，见表1，甘油醛3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为内参基因，PCR扩增条件为95℃15s，60℃30s，共40个循环，以2-ΔΔCt计算法进行相对定量分析。
