2.1 明太鱼鱼籽蛋白提取

鱼籽蛋白采用酸法提取^[4]，将新鲜明太鱼鱼籽捣碎成糊状，与HCl溶液（pH=2.39）按1：9的比例混合，NaOH溶液调节pH至5.74（等电点），pH计测定稳定后，4℃下反应1.5 h，4500r/min离心15min，除去溶液表面油脂，剩余样品通过100目筛绢布去除不溶物，得到明太鱼鱼籽蛋白溶解液。

2.2 响应面法优化抗氧化氨基酸酶解条件

复合酶^[5-7]法酶解提取的鱼籽蛋白，胰蛋白酶和木瓜蛋白酶按不同比例混和,90℃灭酶20min，氨基酸试剂盒测定酶解后总氨基酸含量，筛选复合酶最佳比例。

总氨基酸含量=［（测定管A₆₅₀-空白管A₆₅₀）/（标准管A₆₅₀-空白管A₆₅₀）］标准浓度（50μmol/ml）/样品蛋白浓度。                                    公式1

Design-Expert 8.0.6.1软件进行响应面法中心组合设计，以羟自由基清除能力为响应值，设置酶底比、酶解温度、酶解pH、酶解时间四个因素为自变量，开展四因素三水平的响应面试验（见表1），对鱼籽中抗氧化氨基酸酶解条件进行优化。

表1  响应面试验因素及水平

Table 1  Response surface test factors and levels

2.3 抗氧化肽制备

酶解鱼籽蛋白溶解液，90℃灭酶20min，冷却至室温，4500r/min离心10min取上清液，冷冻干燥后备用.