2.1菊花提取工艺

黄山菊花—粉碎—称重—浸泡12小时—抽滤—60℃浓缩—真空干燥—粗提物

2.2 ABTS法检测抗氧化能力

将等体积的ABTS溶液和氧化剂溶液混合配置成ABTS工作母液，室温避光存放24小时。使用前，把ABTS工作液用PBS稀释30-50倍，要求ABTS工作液的吸光度减去相应的PBS空白对照后，A734为0.7±0.05，对应的A405在1.4左右。称取菊花粗提物粉末100mg，用适量蒸馏水充分溶解。同时，用蒸馏水将10mM Trolox标准溶液稀释成0.15、0.3、0.6、0.9、1.2和1.5mM。于96孔板的每个检测孔中加入200微升ABTS工作液，空白对照孔中加入10微升蒸馏水；标准曲线检测孔中加入10微升各浓度Trolox标准溶液；样品检测孔中加入10微升样品溶液，轻轻混匀。室温孵育2-6分钟后测定A734。根据标准曲线计算样品的总抗氧化能力。

2.3 FRAP法检测总抗氧化能力

将TPTZ稀释液与TPTZ溶液充分混匀再加入检测缓冲液，从而配制成FRAP工作液。称取菊花粗提物粉末100mg，用适量蒸馏水充分溶解。称取27.8mg本试剂盒提供的 FeSO4•7H2O，溶解并定容到1ml，此时浓度即为100mM。取适量100mM FeSO4溶液用蒸馏水稀释至0.15、0.3、 0.6、 0.9、 1.2和1.5mM。于96孔板的每个检测孔中加入180微升FRAP工作液，空白对照孔中加入5微升蒸馏水；标准曲线检测孔中加入5微升各浓度FeSO4标准溶液；样品检测孔中加入5微升样品溶液，轻轻混匀。室温孵育2-6分钟后测定A593。根据标准曲线计算样品的总抗氧化能力。