1.3黑牛肝菌担孢子的收集

在工厂化栽培菇房中预留黑牛肝菌子实体，即将成熟时进行采收。以无菌水冲洗子实体后，用75%酒精对其进行表面消毒，并用解剖刀去除菌柄。菌盖于室温下置于灭菌滤纸片上，12h-24h后即形成孢子印，随即将该滤纸片剪成条状放入灭菌试管备用。

1.4 不同培养温度对孢子萌发的影响

用血球计数板进行计数，以无菌水将孢子稀释至浓度3´10⁴个/ml。将制好的孢子悬浮液充分震荡后，取200ml，在M1固体培养基上涂布后分别置于15，20，25，30，35⁰C培养箱中培养50d，每个处理6个重复。

1.5浸泡时间对孢子萌发的影响

以无菌水将孢子稀释至浓度3´10⁴个/ml，并分别在室温下放置0h，12h，24h，36h，48h，60h，72h，取200ml涂布于M1固体培养基，30℃培养50d，每个处理6个重复。

1.5孢子稀释液 pH值对孢子萌发的影响

以1mol/L的HCl或NaOH 制备pH值分别为4，5，6，7，8，9的无菌水，以未调pH值的无菌水作为空白对照（CK），稀释黑牛肝菌担孢子至浓度3´10⁴个/ml。取200ml涂布于M1固体培养基，30℃培养50d，每个处理6个重复。

1.6 不同碳源稀释液对孢子萌发的影响

分别配置1%的蔗糖、果糖、淀粉、乳糖以及葡萄糖溶液，灭菌后用于稀释孢子，以无菌水作为空白对照（CK），稀释至浓度3´10⁴个/ml后，取200ml涂布于M1固体培养基，30℃培养50d，每个处理6个重复。