1.3  青皮多酚的纯化

大孔树脂吸附的成分中除了多酚以外，还有大量的色素和脂肪酸，为进一步提高提取纯度，需对洗脱液进行再次纯化。将吸附饱和的大孔树脂湿法装入层析柱中，无水乙醇作为洗脱液以1.0 mL/min的洗脱流速进行洗脱。洗脱液收集于锥形瓶中，缓慢滴加5% NaHCO₃溶液（质量分数）至溶液约pH 6.50，离心分离沉淀物，取上清液备用。将上清液置于-20 ℃的恒温冰箱中3 d，取出后迅速分离结晶物与上清液，重复3次冷冻分离结晶物操作后的清液即为纯度较高的青皮多酚溶液。

1.4  抗氧化能力测定方法

1.4.1  抗氧化性

采用硫氰酸铁比色法进行测定^[7]。取500 mg吐温-20和青皮多酚样品加磷酸钾缓冲液定容至100 mL制备青皮多酚乳浊液，以青皮多酚标准品与磷酸钾缓冲液配制的混合液为空白对照。在一定温度下避光培养7 d后采用硫氰酸盐法测定其氧化程度，于波长520 nm处测其吸光度。

1.4.2  还原性

采用铁氰酸钾还原法测定青皮多酚的还原能力。在1.0 mL样品溶液中滴入磷酸盐缓冲液和铁氰化钾溶液，70 ℃水浴条件下加热30 min，加入少量的三氯乙酸溶液后静置至室温，补加去离子水和氯化铁溶液，静置一段时间后于710 nm波长处测吸光度。设置空白管为对照并调零，测定的吸光度越大则青皮多酚还原能力越强。

1.5  试验中的其他分析测试

1.5.1  高效液相色谱分析

流动相选用无水乙醇-水体系，流动相比例3∶1。设置进样量10 μL，流速0.5 mL/min，分离时间45 min，检测波长356 nm，AUFs=0.02，柱温30 ℃，色谱柱型号采用安捷伦Eclipse Plus C18（6.5 mm×300 mm）。