1.2.1 ATRA与BMP2对C3H10T1/2细胞的诱导
C3H10T1/2细胞以1x105/cm2接种于6-Well培养板中，含有10%FBS的DMEM培养24小时后，弃培养液，PBS漂洗，换用含有5％FBS的培养基，分别加入20μg/mL（本实验室摸索最佳成脂肪诱导浓度）的BMP-2及不同浓度的ATRA（10-5 mol／L,0.5×10-5 mol／L, 10-6 mol／L）进行诱导，每隔2d换液，追加20μg/mL的BMP2及相应浓度ATRA的诱导，于1d，3d，6d，9d，12d后收集细胞备用。同时培养未诱导细胞作为对照，于1d，3d，6d，9d，12d后收集。
1.2.2 定量RT-PCR
将培养1d，3d，6d，9d，12d的细胞用Trizol抽提RNA，Superscript Ⅲ进行逆转录，42℃反应30分钟，逆转录引物采用Oligo dT与Random Hexamer。Realtime定量PCR反应体系：2×PCR premix 10μl, Primers 0.8μl, cDNA 1μl，H20补平体积20μl，每组以18srRNA作为内参；反应条件： 95℃ 10min, 95℃ 15s，60℃ 60s，读板，共50 个循环；融解曲线分析：温度55℃-95℃， 每分钟读1次。每个样设置3个复孔。
1.2.3 油红O染色
将培养12d的细胞用PBS清洗后加10％甲醛溶液固定20min，再用PBS清洗两次，1，2－乙二醇作用5min，之后油红O溶液染色,7min。1，2－乙二醇作用3min，单蒸水洗，苏木精染色1min，水洗，镜检。
1.2.4 油红O染色提取法测定细胞内脂肪含量
镜检后，每孔加入100％异丙醇2．5 IIll，恒温摇床震荡15 min以萃取被染细胞中的油红O，以相同处理过的空白孔为对照，分光光度计500 nm比色，记录光吸收值．
1.2.5 统计学分析
采用SPSS 19.0 软件对数据进行单因素方差分析(ONE WAYANOVA) ,方差分析采用LSD 法。实验数据以平均值±标准误(mean ±SE)表示。
