1.2.1流式细胞术分析评价Gr-1抗体耗竭肺部中性粒细胞的效果

1.2.1.1 小鼠处理与肺脏单细胞悬液制备

于攻毒前16h,0h分别腹腔注射Gr-1（IgG2b型别）抗体或IgG2b同型对照，采用2× LD₅₀剂量的RT对雌性C57BL/6J小鼠采用肺递送方式攻毒，分别于RT肺中毒后12h和48h处死小鼠。向肺脏内灌入1mL消化液并将整个肺脏浸泡于消化液中，放入摇床37℃ 200rpm振荡消化60min。消化完成后研磨，裂解红细胞。离心后弃上清，每样品采用1mL含2% FBS的PBS缓冲液重悬后使用200目尼龙纱布将单细胞悬液过滤至1.5mL的EP离心管。

1.2.1.2 肺脏细胞染色及流式细胞术检测

每样品分别吸取约2×10⁶肺脏单细胞悬液，采用PBS洗涤一次。染色前，先对各样品管采用CD16/CD32抗体进行封闭，于4℃封闭15min后，各样品中分别加入配好的混和抗体（见表1.1），单染管细胞只加一个抗体，混悬细胞后于4℃避光染色30min。染色结束后，采用含0.5% BSA的PBS缓冲液洗涤细胞一次。采用含0.5% BSA的PBS缓冲液重悬细胞后用流式细胞仪检测。

1.2.2肺脏组织病理学分析

采用2× LD₅₀剂量的RT对雌性C57BL/6J小鼠采用肺递送方式攻毒，分别于肺中毒后12h、48h处死小鼠，迅速将小鼠整个肺脏取出并浸泡于4%多聚甲醛固定液。固定至少48h后，按照标准操作流程，分别对各组脏器进行脱水后采用石蜡包埋，然后采用组织切片机切片3-5μm。后续按照固定染色程序，将切片放于载玻片后，依次采用苏木精、伊红染色液染色，然后脱水封片后采用光学显微镜镜检，每组3只小鼠。