产色素微生物的筛选
更新日期:2020-11-09     来源:食品工业   作者:陈海燕  浏览次数:180
核心提示:1.1色素最大吸收波长的测定将菌株接种至无菌 LB液体培养基,150 r/min,30 ℃ 条件下培养3 d 得到含菌发酵液。取5 mL发酵培养液,离心(4000 r/min,1

1.1 色素最大吸收波长的测定

将菌株接种至无菌 LB液体培养基,150 r/min,30 ℃ 条件下培养3 d 得到含菌发酵液。取5 mL发酵培养液,离心(4000 r/min,10 min)获得菌体,加适量无水乙醇直接研磨5 min,之后全部转移到离心管,加入无水乙醇至10 mL,离心后取上清液,得到色素粗提液,利用分光光度计测定色素的最大吸收波长[12]

1.2 菌株的鉴定

1.2.1 菌株的形态学鉴定

将菌株接种至LB培养基中,30 ℃ 培养3 d观察菌落的形状、大小、颜色等特征。挑取少量菌体进行细菌制片,经革兰氏染色后观察菌体细胞的个体形态特征。

1.3.2 菌株的16S rDNA鉴定

菌种DNA的提取采用的是试剂盒提取法。DNA提取成功后进行PCR扩增,通用引物(27F:5'AGAGTTTGATCMTGGCTCAG3',1492R:5'TACGGYTACCTTGTTACGACTT3')由Takara合成。

PCR反应体系[13]:10×PCR buffer 5μL,dNTP mix(2mM)4μL,引物1(10pM)1μL,引物2(10pM) 1μL,Taq酶(2U/μL)1μL, DNA模板(50ng-1μg/μL)1μL, 加ddH2O至 50μL,将上述反应体系稍加离心,放置PCR仪上,进行扩增。反应程序[14]:93℃预变性3-5min;循环扩增:93℃,40s → 58℃,30s → 72℃,60s,循环35次;72℃保温7min,即获得目标DNA的扩增产物。测序,结果在NCBI上进行Blast分析,利用生物信息学软件Mega7.0构建系统发育树。

1.4 色素性质研究

设置不同NaCl、蔗糖、温度、pH和氧化剂梯度,在最大波长处检测上述因素对色素稳定性的影响,并将色素发酵液暴露于不同光照条件下2.5 h,测定色素稳定性[15-16]

2 结果与分析

2.1 产色素微生物的筛选

采样土壤微生物参照1.1筛选分离纯化共获得16株产色素菌株,其中11种黄色,3种红色,2种橘红色,部分菌株菌落形态如图1所示。挑取单菌落斜面培养并保存。