1.2.1 柚皮柑粗酶液的制备及酶活的测定

    将黑曲霉从斜面菌种上转接到100 mL的液体培养基30 ℃培养48h，活化直至其形状稳定。然后将黑曲霉以5%的接种量接种到200 mL液体培养基中30 ℃培养48h，离心后将发酵液进行浓缩其体积至50 mL，得柚苷粗酶液。

   柚苷酶活力的测定：取2 mL0.1 %柚皮苷标准溶液和0.2mol/L pH4.0醋酸缓冲液1.9ml置于试管中，在40℃恒温水浴中预热4-5min，然后加入预先准备好的酶液0.1mL，充分摇匀，准确保温30 min，迅速吸取0.1mL ，置于15 mL的比色管中，加入90 二甘醇5ml+蒸馏水0.4 mL和l mol/L NaOH溶液0.5 mL，摇匀，在30℃保温30 min，倒入厚度为l cm的比色皿中，在420 nm波长下测定吸光度。柚苷醣活力的定义为：在40℃，pH4.0条件下，每分钟每毫升酶液分解柚皮苷的微克数^[12]。

1.2.2 柚汁制备流程

柚子→去皮→破碎→榨汁→加入果胶酶→搅匀→抽滤→离心(4000r/min、10min) →原果汁

1.3 试验设计

1.3.1 单因素试验设计

(1)  酶解时间对脱苦效果的影响

   分别取4.0 mL柚汁装入6根试管中，并向各试管中添加1.0 mL的粗酶液，在40 ℃条件下分别酶解30 min、60 min、90 min、120 min、150 min、180 min，酶解结束后，测定各反应体系中柚皮苷的含量，并计算其脱苦率。

(2)  酶解温度对脱苦效率的影响

   分别取4.0 mL柚汁装入6根试管中，并向各试管中添加1.0 mL的粗酶液，分别在20 ℃、30 ℃、40 ℃、50 ℃、60 ℃条件下酶解90 min后，测定各反应体系中柚皮苷的含量，并计算其脱苦率。