1.3.1  褐藻糖胶粗品制备方法

工艺流程：干海带→粉碎、过40目筛→柠檬酸-褐藻酸钠缓冲液浸提→复合酶解→升温灭酶→NaOH溶液碱溶消化→过滤→滤液加HCL溶液酸凝过夜→加Na₂CO₃溶液中和→4倍体积乙醇醇析→减压抽滤→沉淀→干燥→褐藻糖胶粗品。

酶解条件^[26]：1%纤维素酶、0.5%中性蛋白酶、0.5%复合蛋白酶、1%果胶酶，料液比1: 40(g/mL)，pH6.0，温度60 ℃，时间3 h。

1.3.2  褐藻糖胶组分的分离方法

1.3.2.1  薄层层析分离褐藻糖胶

层析液为正丁醇：乙醇：水=2:1:1(V:V:V)，显色剂为20%硫酸，在105 ℃加热20 min使其显色。

1.3.2.2  DEAE-Sepharose FF弱阴离子交换柱层析分离褐藻糖胶

称取不同质量（0.1 g、0.2 g、0.3 g、0.4 g）褐藻糖胶粗品，于20 mL，pH7.4，0.02 mol/L的磷酸盐缓冲液溶解，上样于平衡好的DEAE- Sepharose FF弱阴离子交换柱（F1.6 cm×30 cm），用pH7.4，0.02 mol/L的磷酸盐缓冲液，0-2.0 mol/L的NaCl溶液线性梯度洗脱，流速0.5 mL/min，利用自动部分收集器收集，7.5 mL/管。通过苯酚-硫酸法测定多糖含量，以管数为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制相应的洗脱曲线，收集各洗脱峰，浓缩超滤后冷冻干燥。

1.3.2.3  高效液相凝胶色谱分离褐藻糖胶

取适量褐藻糖胶粗品，以超纯水为溶剂，配制200 μg/mL的样品溶液，0.45 μm微孔滤膜过滤，样品保存备用。

色谱条件：Agilent1100高效液相色谱系统；Waters Ultrahydrogel^TM linear色谱柱（F7.8 mm×300 mm）；流动相：超纯水；流速：0.6 mL/min；柱温：40 ℃；进样量：20 μL；