1.3.1 黑果枸杞原花青素提取工艺流程
黑果枸杞→烘干(40 ℃)至恒重→粉碎(60目)→超声细胞破碎法提取→离心取上清液(8000 r/min ,10 min)→原花青素提取液。
1.3.2 黑果枸杞原花青素含量测定
1.3.2.1 标准曲线的绘制
采用改良的浓盐酸-香草醛法测定原花青素的含量[14],称取20 mg原花青素标准品,用甲醇定容至20mL,配制成1 mg/mL的原花青素标准溶液,分别移取1、2、3、4、5 mL至10 ml容量瓶中,用甲醇定容至刻度,各取1 mL至25 mL比色管中,依次加入6.0 mL 4%(w/v)香草醛甲醇溶液和3.0 mL浓盐酸,混匀后在30±1 ℃的恒温水浴中避光反应20 min,然后以甲醇溶液作为空白,在500 nm的波长下用紫外分光光度计测定吸光度,绘制标准曲线,得到回归方程y=0.948x-0.0008,R2=0.9993,其中x为原花青素浓度,mg/mL;y为500nm下的吸光度值。
1.3.2.2 样品中原花青素含量的测定
将黑果枸杞粉碎后过60目筛,准确称取黑果枸杞粉末2.0 g,按设定的料液比加入一定体积分数的乙醇,在设定的功率下进行超声细胞破碎提取,提取结束后,离心收集上清液并定容至一定体积(视情况而定),移取1 mL提取液替代上述方法中的标准液测定吸光度,重复测定三次,计算样品中原花青素含量及原花青素得率。