1.3.4 萝卜硫素提取物的抗辐射功效检测
根据正交试验中确定的最佳提取条件提取SFN,用无水乙醇将SFN提取物配制成SFN浓度为3 μg/gDW,6 μg/gDW,9 μg/gDW,12 μg/gDW的乙醇溶液,取200 μL不同浓度样品分别加至96孔板中,平行4次,使用酶标仪扫描样品在280-320 nm处的紫外吸收光谱图[16, 17]。
1.3.5 萝卜硫素提取物的DPPH抗氧化检测
DPPH自由基乙醇溶液呈深紫色,在515~520 nm处有最大吸收峰,加入抗氧化剂后被还原,吸光值降低,降低程度与抗氧化剂呈剂量关系,可由酶标仪测得[18]。
无水乙醇将SFN提取物配制成SFN浓度为3 μg/gDW,6 μg/gDW,9 μg/gDW,12 μg/gDW,18 μg/gDW,24 μg/gDW,36 μg/gDW,48 μg/gDW的乙醇溶液。用移液器吸取90 μL浓度为100 μmol/L的DPPH溶液至96孔板中,并在相应样品孔中加入10 μL不同浓度的SFN溶液,每个梯度设置4个平行,室温避光放置1 h,在520 nm处检测吸光值,记为A1,空白组用无水乙醇代替样品溶液,吸光值记为A0[19,20]。
DPPH自由基清除率(%)=(A0-A1)/A0 公式(1)
1.3.6 萝卜硫素提取物的ABTS抗氧化检测
ABTS在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的ABTS·+,在抗氧化物存在时,ABTS·+的产生会被抑制,在734 nm测定ABTS·+的吸光度即可测定并计算出样品的总抗氧化能力[21]。
在样品检测前,使用等体积ABTS溶液和氧化剂溶液配制ABTS 工作母液,室温避光存放12-16 h后,将ABTS工作母液用80%乙醇稀释成ABTS工作液,减去空白组吸光值的ABTS工作液吸光值A734应为0.7±0.05。用80%乙醇将SF提取物配制成SFN浓度为3 μg/gDW,6 μg/gDW,9 μg/gDW,12 μg/gDW,18 μg/gDW,24 μg/gDW,36 μg/gDW,48 μg/gDW的乙醇溶液。用移液器移取190 μL ABTS工作液,加入10 μL不同浓度的样品溶液,混匀,每个梯度设置4个平行,室温避光保存1 h,在734 nm测定吸光值,记为A1,空白组用80%乙醇代替样品溶液,吸光值记为A0[20,22,23]。