2.1 高效液相色谱法测定山沉香乙酸乙酯提取物SECO含量

2.1.1色谱条件

Agilent ZORBAX Extend-C18色谱柱（4.6×150mm,5μm，SN ΜSHKB12465）；流动相：0.1%甲酸（A）-甲醇（B）；洗脱梯度（0-10min，A：70%-60%，B：30%-40% ；10-20min，A：60%-55%，B，40%-45%；20-30min，A：55%-55%，B：45%-45%；30-40min，A：55%-54%，B：45%-46%；40-50min，A：54%-15%，B：46%-85%）;流速为0.5mL/min；柱温30℃；检测波长为280nm。在此条件下SECO色谱峰与相邻组分峰分离，达到分离要求，结果见图1。

2.1.2 溶液制备

对照品溶液：精密称取SECO对照品1.40 mg，置于10 mL容量瓶内，加入甲醇定容至刻度，超声溶解(功率为500 W，频率为40 kHz)，配制浓度为0.140 mg/mL的对照品溶液，摇匀，即得。

供试品溶液：精密称取山沉香乙酸乙酯提取物50.50 mg，置于20 mL容量瓶内，精密加入甲醇20 mL，称定质量，超声处理30 min(功率为500 W，频率为40 kHz)，放冷，再次称定质量，用甲醇补足损失重量，摇匀，既得。

2.1.3 方法学考察

线性关系考察：精密量取“2.1.2”项下对照品溶液，依次稀释浓度为 0.028 mg/mL,0.056 mg/mL,0.112 mg/mL,0.168 mg/mL,0.224 mg/mL,0.280 mg/mL溶液。各取稀释后的对照品溶液5μL注入高效液相色谱，测定峰面积。以峰面积(Y)为纵坐标，进样浓度(X，mg/mL)为横坐标进行线性回归，得线性回归方程，Y= 2838.6X+59.354(r²= 0.9997)，对照品SECO浓度在0.028~0.280 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好。