2.1 不同保存时间粪便保存液效果
(1)一个健康受试者的新鲜粪便样本均分为4份。其中,一份新鲜抽提DNA;一份未加任何保存液,于室温保存3天后抽提DNA;一份置自制保存液中,于室温3天后抽提DNA;一份置自制保存液中,于室温7天后抽提DNA。将抽提DNA进行琼脂糖凝胶电泳分析(每份上样5mL),用Qubit检测抽提DNA浓度,用qPCR法检测人β-globin的DNA水平。如图1和表1,置自制保存液中保存在不同时间的三份样本,均可以有效地抑制室温下微生物DNA的增生。同时,有效保护了人源细胞DNA的存量,有助于后续人源DNA的基因检测与信息分析。
(2)三个健康受试者(A\B\C)的新鲜粪便样本,分别均分为五份,各在五种不同保存条件下保存七天(室温1天、-80度冻存6天,室温2天、-80冻存5天,室温3天、-80冻存5天和-80冻存7天、室温7天)。之后,抽提样本DNA,进行琼脂糖凝胶电泳分析(每份上样5mL),经Nanodrop分光光度计检测,获取DNA浓度及OD260/OD280值。用qPCR法,检测人源β-globin的基因拷贝数。如图2和表2,三个样本A、B和C在自制保存液条件下,在不同保存温度和时间点,其抽提的DNA浓度及β-globin水平均趋于稳定。