1.2 玉米秸秆酶解液制备
称取经过水热预处理[9-12]的玉米秸秆28.0g(绝干底物),粉碎至40目,置于500ml 三角瓶中,加入150mlHAc-NaAc缓冲液(pH=4.8、浓度O.lmol/L)、1.2ml浓度为lOmg/ml的盐酸四环素溶液、15ml浓度为0.5%的NNO (亚甲基二萘磺酸钠)溶液和15ml浓度为0.2%的JFC-S溶液。同时加入15FPU/g底物的纤维素酶和1.5CBU/g底物的纤维二糖酶,补加蒸馏水至液体总体积为3OOml,最加入20颗玻璃球,盖上瓶塞,混合均匀后,将三角瓶放入摇床内进行酶解,温度设为49-50℃、转速180r/min、酶解时间80-85h。酶解液过滤,既得秸秆酶解液。
1.2 木霉菌株活化
将木霉T41菌株接种在PDA培养基中间位置, 于26℃恒温培养3-5d, 待绿色菌落长满培养皿后备用。
1.3 液体发酵试验
超净工作台处无菌状态下,用移液管分别量取100 ml PD 培养基、玉米粉培养基、燕麦培养基和秸秆酶解液培养基,放于已灭菌的250 ml三角瓶内,每瓶接入T41木霉菌饼3片(用直径5 ml打孔器截取),置于25℃、转速150r/min恒温摇床上培养13 d。并在第9d起,每天用血球计数板测厚垣孢子产孢量。每处理重复3次,并记录。