摘要: 目的：评价冷休克和超低温处理对猪精子蛋白泛素化水平及体外受精的影响。方法：本研究对不同处理（鲜精、附睾精子、冷休克精子、冷休克附睾精子、温-80℃精子、-80℃附睾精子、-196℃精子和-196℃附睾精子）的猪精子蛋白进行分离，通过CASA、SDS-PAGE电泳、Western blot检测和分析。结果表明：.鲜精和附睾精子分别进行低温处理，附睾精子的生物学指标优于鲜精； 低温和冷休克处理后，鲜精和附睾精子的蛋白表达量发生变化；精子和附睾精子均发生蛋白质泛素化，大部分集中在30kDa、 46kDa、62kDa，冷休克处理会降低精子蛋白泛素化水平；低温处理后鲜精蛋白泛素化水平下降，而附睾精子蛋白泛素化水平无显著变化；低温及冷休克处理后，附睾精子的卵裂率高于鲜精。 结论：低温处理的猪精子导致泛素化蛋白降解或改变，使体外受精也随之受到影响。
关键词:猪精子；鲜精；附睾精子；泛素化
随着哺乳动物体外受精、胚胎体外生产、转基因和动物克隆等高新技术的不断应用和开发，人们对具有受精能力和发育潜力的高质量卵母细胞的需求量日益增加。猪卵母细胞体外授精技术的建立、无论对于科学研究还是生产应用都具有非常重要的社会经济价值。那么猪卵母细胞在不同体外成熟时间直接影响到后期的胚胎发育。影响猪卵母细胞体外成熟因素很多，并且均对胚胎的后期发育至关重要。猪卵母细胞的体外成熟包括细胞质成熟和细胞核成熟两方面。细胞核成熟以第一极体排出为标志。而细胞质成熟商没有统一的标准，多少情况下采用体外受精时的原核形成率作为细胞质成熟的依据[1-2]。
泛素（Ubiquitin，Ub）是一种由个氨基酸残基组成的高度保守的热稳定小分子蛋白质，最初是由科学家从分离促性腺生成素中春花得到，随后发现其广泛存在于包括原核生物在内的所有物种活细胞中[3-5]。泛素化(ubiquitination)是指泛素分子在一系列酶的作用下，对靶蛋白进行特异性修饰的过程。有这样一些特殊的酶把细胞内的蛋白质进行分类,并能从中筛选出靶蛋白的分子。多数基板蛋白酶体会被确认后再合成多聚泛素链[6-7]。单泛素化可以作为细胞靶向或定位信号，但它似乎并没有靶蛋白的蛋白酶体所必需的有效结合的蛋白酶体，它的组分S5A/ RPN10含有至少4个分子的G76-K48形成异肽连接的泛素链[8]。结合于蛋白酶和链长度之间的关系不是固定的，4个泛素结合成的泛素链比2个泛素结合的泛素链更好[9]。显然，证据指向为目标的多聚泛素信号和受体位点的蛋白酶体疏水相互作用。并且在几乎所有的真核细胞活动中起着重要的作用。而且它也在蛋白质的定位、功能、调节、代谢和降解中都会起着非常关键的作用。
作者：玄彪