【摘要】 目的 提高目前人半翼基因（hWAPL）表达对人群检测的统计学分析方法的研究水平【1】，研究适用于宫颈癌受检者个性化的hWAPL基因表达荧光定量精确检测方法,提高该方法临床诊断的准确性和实用性。 【方法】 设置β-actin基因内标，研究该基因表达值的精确计算方法，建立适用于临床检验的RT-PCR一步检测方法，并以TCT 联合宫颈组织病理活检为“金标准，对收集的宫颈癌筛查样本218 例检测，使用诊断实验四格表和ROC曲线的统计学进行统计学分析，选择合适的临界值，评价其诊断价值。【结果】 TCT 联合宫颈组织病理活检阴性129例，阳性89例。用 人半翼基因(hWAPL)表达的比值判断宫颈癌发生，在临界值为3.5条件下，检出阴性125例，阳性93例。ROC曲线的统计学分析，曲线下的面积(AUC)为1，具有高度的特异性和敏感性。【结论】 hWAPL基因的高表达与宫颈癌发生密切相关【2】【3】，本研究的hWAPL基因表达精确的检测方法，具有高度特异性、灵敏性、稳定性，阳性检出率高于TCT 联合阴道镜下宫颈组织病理活检，改变目前基因表达检测只能作群体统计学分析的状态【1】，而使该方法适用于宫颈癌受检者个性化筛查和宫颈癌的诊断。
【关键词】宫颈癌；人半翼基因；基因表达值
人半翼基因是一个宫颈癌特异性高表达基因,表达水平显著高于正常宫颈组织,相对于HPV感染,hwapl的表达与宫颈癌关系更为密切【2】【3】。目前基因表达荧光定量检测方法，仅停留在样本检测的差异统计学研究，从而阻碍这项检测方法的的应用和推广【4】。 本研究用一系列质量控制方法，使检测临床个体样本达到临床需求的精确性和稳定性。本研究的方法已获专利【5】，本篇研究又通过对大量临床样本检测的研究，提高了该检测方法在临床实验诊断的实用性。
1 材料与方法
1.1材料
样本来源：宫颈癌筛查的样本在2013 年5月至2016 年9月期间内，收集于武汉市协和医院肿瘤治疗中心和湖北省肿瘤医院，受检者218 例，年龄28～75 岁，平均年龄45岁。受检样本接受了TCT检查及阴道镜下宫颈组织病理活检、hwapl荧光定量RT-PCR检测。
试剂与仪器：总RNA抽提试剂Trizol为Invitrogen公司产品；AMV逆转录酶为宝生物工程（大连）有限公司产品；Taq酶为MBI公司产品；Taqman荧光探针购自华大基因（北京）公司；Hela宫颈癌细胞株购自武汉大学细胞保藏中心；构建β-actin基因和hwapl基因克隆菌株购自华大基因（北京）公司。 荧光定量PCR仪为为美国ABI 7300型。
作者：李亦武