摘要：目的 探讨 Testin（TES）蛋白在肺癌组织和肺癌细胞系中的表达以及 TES 对人肺癌 A549 细胞增殖迁移侵袭及凋亡的影响。方法 采用 Western blot 法检测肺癌组织和癌旁组织中 TES 蛋白的表达，同时检测正常人胚肺成纤维细胞系（MRC5）以及肺癌细胞系（A427、A549、 H1299、LK2、PC9 和 SW900）中 TES 蛋白的表达。应用短发卡 RNA（shRNA）瞬时转染肺癌 细胞株 A549 干扰 TES 基因的表达，将培养的 A549 细胞分为两组：shRNA 对照组和 shTES 干 扰组，通过 Western blot 和实时定量 PCR 方法检测 shTES 在 A549 细胞中的干扰效果。并通过四 甲基偶氮唑蓝（MTT）法、划痕实验、Transwell 侵袭实验以及 Tunel 检测干扰 TES 蛋白表达对 A549 细胞增殖、迁移、侵袭以及凋亡的影响，同时通过 Western blot 法检测凋亡相关基因 Bax、 Bcl-2 和 C-caspase3 的表达。结果 TES 蛋白在肺癌组织和肺癌细胞系中的表达较癌旁组织和肺 正常细胞系明显下降。shTES 干扰肺癌细胞株 A549 中 TES 的表达后，TES 蛋白水平和 mRNA 水平都显著下降；MTT 实验结果显示，shTES 转染后 A549 细胞的生长能力增强；划痕实验结果 显示，shTES 转染的 A549 细胞株迁移能力明显高于正常 A549 细胞株；Transwell 小室检测结果 显示，shTES 组细胞侵袭细胞数明显高于 shRNA 对照组；Tunel 实验显示，较 shRNA 对照组细 胞，shTES 组细胞凋亡水平显著下降；Western blot 对凋亡相关蛋白基因检测显示，shTES 组细 胞中，Bax 和 C-caspase3 的蛋白表达明显下降，而 Bcl-2 的蛋白表达则明显升高。结论 TES 在 肺癌组织中呈低表达，干扰 A549 细胞中 TES 蛋白的表达后会增强癌细胞的增殖、迁移和侵袭能 力，同时抑制凋亡的发生。TES 有可能成为肺癌治疗一个新的靶点。
关键词：肺癌；A549 细胞；TES；RNA 干扰
近年来，肺癌的发病率在全球范围内呈持续上升趋势，严重威胁着人们的健康和生命[1]。 Testin（TES）基因是 Tatarelli 等从人 7 号染色体克隆得到的一种抑癌基因，定位于染色体 7q31.2 脆性部位 FRA7G，在正常组织中广泛表达，而在多种原发肿瘤和肿瘤细胞系中表达 缺失，表明 TES 是参与肿瘤发生、发展的重要分子，并可能成为癌症恶性程度及预后的预 测因子[2]。已有研究证实，TES 参与胃癌[3]、乳腺癌[4]、结直肠癌[5]、头颈部实体恶性肿瘤[6] 以及血液系统肿瘤[7]等多种肿瘤的发生发展，但 TES 在肺癌中的表达并未见文献报道，TES 能否影响肺癌的生物学行为也没有相关研究。为了明确这些问题，本研究检测了 TES 基因 在肺癌组织及癌旁正常组织中的表达；同时，我们在肺癌细胞系 A549 中通过 shRNA 干扰 TES 基因的表达，检测肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡能力的变化。旨在分析 TES 在肺 癌发生、发展中的作用，以期为肺癌分子靶向治疗提供理论依据。
作者：王玲