摘要：为评价长春某野生动物园圈养野鸟新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)携带情况，对该园960份健康野鸟的咽拭子和粪便样品进行NDV病毒的分离和鉴定，并对NDV分离株进行遗传进化分析。结果分离到6株NDV，测序证明其同源性为100%，属同一株毒株。将该分离株与实验室保存的野外野鸟的7株NDV毒株进行基因序列分析，并构建F和HN基因系统进化树，表明8株NDV符合弱毒株的分子特征，均属于classⅡ类群，其中5株位于基因Ⅰ型分支，3株位于基因Ⅱ型分支，且与疫苗株Lasota、B1、SDFC07、V4同源性较高。本研究证明该园健康圈养野鸟是classⅡ类群NDV的携带者。
关键词：新城疫；病原学；序列分析
新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)属于副黏病毒科(Paramyxoviridae)腮腺炎病毒属(Rubulavirus)成员[1]，是一种不分节段单股负链RNA病毒。NDV基因组RNA的长度为15 186个核苷酸，基因组RNA包含六个连续基因，共编码的结构与非结构蛋白有：基质蛋白(Matrix protein，M)，磷酸化蛋白(Phosphoprotein，P)，凝集素神经氨酸酶蛋白(Haemagglutinin Neuraminidase protein，HN)，融合蛋白(Fusion protein，F)，核衣壳蛋白(Nucleuo protein，NP)以及分子量很高的的RNA依赖性RNA聚合酶或大聚合酶蛋白(Large protein，L)六种[2]。其中，HN、F和M蛋白则分别存在于病毒的囊膜上。HN与病毒的血凝性有关，M蛋白构成病毒支撑物与病毒组装有关，F蛋白可以促使病毒进入细胞内[3]。
NDV的宿主范围较广，除家禽外，还可感染约240种野生鸟类。野鸟作为新城疫病毒的自然储存宿主，可能成为NDV的传播媒介，随自然迁徙可将NDV传染给家禽，导致疾病暴发[4]。相关研究显示，NDV可感染50个鸟目中至少27目的250种鸟，并且很多易感动物感染未被发现。为防范NDV对圈养野鸟带来危害，本研究采集了经过免疫的长春某野生动物园野鸟拭子，进行NDV分离鉴定，同时对分离到的NDV毒株的F、HN基因进行进化分析，希望为NDV在圈养野生鸟类中的流行做出预测，为该病的防治提供必要依据。
1材料与方法
1.1材料
9-10龄SPF鸡胚购于北京维通利华实验动物有限公司。新城疫病毒抗原以及阳性血清购自于哈尔滨兽医研究所。Simply P Total RNA Extraction Kit- Simply P试剂盒购买于BioFlux公司；反转录试剂盒购于美国Promega公司；胶回收试剂盒2×Taq PCR MasterMix 购买于北京天根Tiagen生物有限公司。Marker（DL2000）、dNTP（10mmol/L）、dNTP（2.5mmol/L）均购于TaKaRa宝生物工程（大连）公司。
1.2 样品采集
采集自长春某野生动物园的23种圈养野鸟拭子样本360份，粪便样本600份，所有鸟类均进行了新城疫疫苗的免疫。
作者：王海军