胎牛血清的DMEM/F12细胞培养液
更新日期:2022-01-19     浏览次数:203
核心提示:1.3其它试剂与耗材DMEM/F12培养基购自Gibco公司;胎牛血清、胰酶(1:250)购自Hyclone公司;甲醛溶液购自国药集团化学试剂有限公司;白油为进口美孚

1.3 其它试剂与耗材 

DMEM/F12培养基购自Gibco公司;胎牛血清、胰酶(1250)购自Hyclone公司;甲醛溶液购自国药集团化学试剂有限公司;白油为进口美孚白油,购自南通美林行经贸有限公司;吐温-80品牌为英国禾大,购自上海高维贸易有限公司;司本-80品牌为英国禾大,购自上海高维贸易有限公司;AP20激流式生物反应器相关耗材(灌注袋、激流袋、取样器、呼吸袋、储液袋及耐磨管)购浙江金仪盛世生物工程有限公司。

1.4 LMH细胞在激流式生物反应器中培养

将冻存的LMH细胞从液氮罐中取出,置37水浴中快速融化,将细胞移入装有10 mL10%胎牛血清的DMEM/F12培养基的T25细胞方瓶中,37培养。当长成良好单层细胞时,用胰酶消化液消化细胞,按13传代逐级扩大培养。将扩大培养的种子细胞接种转瓶,置37培养48-72 h,转速9-12 r/h。取长成良好单层细胞转瓶,弃去生长液,用0.25%胰蛋白酶溶液消化细胞,将消化好的细胞混合后加入含10%胎牛血清的DMEM/F12细胞培养液,接种至10 LAP20生物反应器培养,细胞总数量不低于1×109个,37培养6 d