促进ADSCs增殖和向SCs分化
更新日期:2022-03-14     浏览次数:174
核心提示:1.1ADSCs的分离和培养无菌条件下取小鼠腹股沟脂肪组织,充分用眼科剪刀机械剪碎后,于0.1% I型胶原酶消化60 ~ 80 min(37C)。分离的细胞于添加10%胎

1.1 ADSCs的分离和培养

无菌条件下取小鼠腹股沟脂肪组织,充分用眼科剪刀机械剪碎后,于0.1% I型胶原酶消化60 ~ 80 min(37°C)。分离的细胞于添加10%胎牛血清,青霉素100 units/ml,链霉素100 mg/ml的DMEM/F12培养基中,在37℃,5% CO2条件下培养。待细胞达到80% ~ 90%融合时,进行消化传代。

1.2 ADSCs多向诱导分化

将第2代的ADSCs消化后,按5×105/ml密度置于6孔板中。ADSCs培养至80%融合时,在含10%胎牛血清、异丁基甲基黄嘌呤(0.5 mmol/L)、地塞米松(10-6 moL/L)、胰岛素(10 mg/L)、吲哚美辛(0.2 mmol/L)的DMEM/F12成脂诱导培养液中培养14 d,在添加10% 胎牛血清的DMEM、地塞米松(10 nmol/L)、抗坏血酸-2-磷酸(50 µg/mL)和β -甘油磷酸(10 mmol/L)的成骨诱导培养液中培养21 d。然后,分别用油红O染色液和茜素红染色液对固定的细胞进行染色,并在倒置显微镜下观察结果。