1.4蛋白提取和WB蛋白表达

样本提取：将小鼠脑组织的样本于液氮保存中取出约100mg，将其放入预冷的离心管中，然后向管中加入裂解液，使其充分混匀后，恒温4℃静置1h后，以每分钟12000的转速将其离心15分钟提取上清液，用二喹啉甲酸的方法进行蛋白浓度的测定；将适量凝胶电泳加入到样本中，使其SDS-PAGE加入样本中，将其100℃加热5分钟，蛋白充分变形后，以每分钟12000的转速将其离心5分钟提取上清液备用，然后配置取进行蛋白电泳、转膜杂交和显色；然后分别配置12%和8%的分离胶以及5%的浓缩胶，进行凝胶电泳后，采用恒电压100V将其转移到膜上，转膜时间分别为Actin用时60分钟，STAT3以及磷酸化STAT3用时90分钟，JAK2以及磷酸化JAK2用时120分钟，然后使用封闭液（包含5%脱脂奶粉）对转印膜进行封闭1小时，然后用TBST以5分钟每次对转印膜进行冲洗3次，加入一抗以温度为4摄氏度将其孵育一夜后将其洗涤3次，每次用时为5分钟，向其加入HRP的二抗，使其在室温中孵育1小时后进行检测及拍照。