1.2 大肠杆菌的专化
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将 1 µl pET28a-CalA3cH(160 ng/µl)和 1 µl pGro7（100 ng/µl）的质粒加入 50 µl
的
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BAPⅠ感受态细胞中，冰上静置 30 min 后，插入 42℃水浴中，热激 45 s。然后迅速放回冰
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上，静置 2 min。在超净台中向感受态细胞中加入 1 ml 不含抗生素的 LB 液体培养基，轻
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轻混匀后置于 37℃恒温摇床，振荡 1 h。吸取适量菌液均匀涂布于含有卡那霉素和氯霉素
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抗性的 LB 固体培养基，放置在 37℃恒温培养箱过夜。
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1.3 蛋白的诱导表达
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挑选合适的单克隆转化子接种于 100 ml 的具有卡那霉素和氯霉素抗性的 LB 液体培养基，
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置于 37℃恒温摇床培养 12-14 h，作为种子液。量取 20 ml 的种子液，转接至 1 L 具有卡
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那霉素和氯霉素抗性的 PLB 液体培养基后，加入 5 ml 20% L-阿拉伯糖溶液诱导分子伴侣
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GroES 和 GroEL 的表达。菌液放置于 37℃摇床培养菌液浓度至 OD 值为 0.6-1.0 后，降温至
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16℃，加入终浓度为 0.1 mmol/L 的 IPTG，继续在 16℃培养 24 h。4000 r/min 离心 15
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min 收集菌体，将其转移至 50 ml 的离心管，-80℃冻存备用。
