1.2.2邻苯二甲酸筛选浓度的确定
分别制备梯度邻苯二甲酸溶液溶液,浓度为0.2、0.3、0.4、0.5、0.6g/L。将剪好的滤纸放进培养皿,裹着报纸放入灭菌器中在121℃下灭菌20min,冷却后倒平板,每个浓度三个重复。用30%过氧化氢溶液没过玉米种子消毒15min,拿蒸馏水冲洗数次,于净化工作台接入不同处理培养皿,用蒸馏水流洗数次,于工作台用镊子放入不同浓度的培养皿中,每个培养皿15粒玉米种子,不用倒扣,放28℃恒温培养箱,避光萌发数天,每24h观察玉米种子的萌发情况。
1.2.3降解菌的初筛
称取玉米土壤10g,制成10-1土壤菌悬液,在28˚C下富集振荡30min,依次稀释成10-3、10-4、10-5的土壤菌悬液。
先培初筛所用的固体培养基,将灭过菌的固体培养基,取上述富集后的土壤菌悬液(稀释度为10-2、10-3、10-4、10-5),每个浓度取150μL菌悬液放在培养基上,放入恒温培养箱28℃倒置培养,之后每天观察其生长状况。
平板长出菌落后,将所有不同的菌在新的固体培养基上进行平板划线,细菌在37℃恒温培养箱中,而真菌放在28℃,倒置培养。每1d观察是否有明显的单菌落,若出现相同的单菌落,挑出来保存。把分离到的单菌落再接移入到液体培养基里,与50%的甘油等体积混合,放冰箱中的-20℃保藏。