基于配体诱导的靶蛋白热稳定的生物物理原理
更新日期:2022-03-20     浏览次数:167
核心提示:1 热蛋白组分析的原理TPP是基于CETSA的原理和使用多重定量质谱的蛋白质组学来监测数千种表达蛋白质的熔解曲线[6]。TPP的原理同CETSA,都是基于配体诱

1  热蛋白组分析的原理

TPP是基于CETSA的原理和使用多重定量质谱的蛋白质组学来监测数千种表达蛋白质的熔解曲线[6]。TPP的原理同CETSA,都是基于配体诱导的靶蛋白热稳定的生物物理原理[7]。配体结合通常导致蛋白稳定和熔解温度(Tm)的正向转移(如图1),通过对比有无配体结合蛋白的Tm是否存在差异即可确定靶蛋白。

2.  热蛋白组分析的方法

目前为止,TPP主要包括温度范围的热蛋白组分析(TPP-TR)、配体浓度范围的热蛋白组分析(TPP-CCR)和二维热蛋白组分析(2D-TPP)。广义上说,TPP的方法步骤主要包括(1)样品制备;(2)热处理;(3)收集可溶性蛋白组分;(4)基于质谱的蛋白组学分析;(5)数据分析[8]。其中样品制备包括要研究的细胞材料和条件改变,细胞材料可以是细胞提取物、完整细胞、组织、生物体液(如血液)和微生物(如古细菌、细菌、原生生物、真菌)[9-15];条件变化通常是化学(如药物或代谢物)、遗传(如基因敲除或过表达)、环境的变化和不同的细胞状态(如细胞周期的不同阶段),也能在无条件变化下研究蛋白质在原位的熔解行为[16-20]。热处理是对样品进行短暂的热处理以诱导蛋白质变性聚集,时间通常为3 min[5]。可溶性蛋白组分通常通过超速离心收集上清液或使用多孔滤板以低速离心收集[21]