1.3金黄色葡萄球菌、MRSA的分离与鉴定

将采集的咽拭子置于预先盛有7.5%氯化钠肉汤的离心管中，37℃恒温培养18h后，三区划线分别接种于金黄色葡萄球菌显色培养基和MRSA显色培养基，37℃培养18~24 h，挑取疑似阳性单菌落，再次划线于上述两种显色培养基中，重复操作3次，挑取单菌落接种于胰蛋白胨大豆培养基中，37℃培养18~24 h后，挑取单菌落涂布到96孔靶板上，使用MS1000全自动微生物质谱检测系统鉴定。上述步骤同时以质控菌株ATCC 29213做阳性对照。

选取部分金黄色葡萄球菌菌株，煮沸法粗提细菌DNA作为PCR模板，参考文献^[13]设计mecA引物： F ：AAAATCGATGGTAAAGGTTGGC， R： AGTTCTGCAGTACCGGATTTGC，产物长度533 bp。反应体系：Go Taq Green Master Mix 12.5μL，上下游引物各0.5μL，模板2μL，DDH₂0补足25 μL。反应程序：95℃预变性5min，95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min,30个循环，72℃再延伸5min。扩增产物经1.5%琼脂糖进行凝胶电泳，电泳缓冲液浓度为1×TAE，130V，25min，凝胶成像仪观察结果。同时以质控菌株ATCC33591作为阳性对照同步进行。