挑选新鲜的白菜,用流水清洗去掉表面泥土,将清洗干净的白菜切成适当大小于无菌环境中放入80%乙醇中浸泡2min,再放入3%有效氯的次氯酸钠溶液中浸泡5min,最终放入80%乙醇溶液中浸泡1min。浸泡完成后用无菌水震荡洗涤3~5次,收集最后一次洗涤的无菌水留做验证。将洗涤后的白菜在无菌条件下用灭菌后的镊子以及剪刀将其裁剪为1cm左右的小块,收集于2ml离心管中编号BNSZ,放置于-20℃冰箱中备用。
1.3.2 表面消毒验证
将上述无菌水用移液枪吸取200µl,涂布于LB固体培养基中,37℃条件下培养48h,观察是否有菌落生长。若无菌落生长则表明表面消毒干净。
1.3.3 可培养内生细菌分离
将上述表面消毒干净后的植物组织放置于无菌水中,震荡3~4h,取震荡后的液体,采用涂布平板法将其涂布于LB固体培养基中,于37℃条件下培养48h。