CCK-8法检测不同转染后RA-FLS的增殖抑制率
更新日期:2022-04-09     浏览次数:119
核心提示:1.1细胞分离培养与转染在加强免疫3天后取材,剥离大鼠踝关节组织,取出滑膜,4℃无菌条件下保存[]。将滑膜组织切碎成大约1mm3小块并在37℃下进行胰蛋

1.1 细胞分离培养与转染

在加强免疫3天后取材,剥离大鼠踝关节组织,取出滑膜,4℃无菌条件下保存[]。将滑膜组织切碎成大约1mm3小块并在37℃下进行胰蛋白酶消化2h。在1000xg离心5min后收集细胞,在含有10%胎牛血清和抗生素(100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素)的DMEM培养基中,保持在37℃、5%CO2的加湿环境下生长。传代3-5次的用于后续实验。

在RA-FLS中分别转染si-NC、si-LINC00667、miR-NC、miR-19a-3p模拟物、si-LINC00667与anti-miR-NC、si-LINC00667与anti-miR-19a-3p,记为si-NC组、si-LINC00667组、miR-NC组、miR-19a-3p组、si-LINC00667+anti-miR-NC组和si-LINC00667+anti-miR-19a-3p组。根据Invitrogen制造商的方案,使用Lipofectamine2000转染试剂将上述质粒转染到RA-FLS中48h,利用定量实时聚合酶链反应(Quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)测定转染效率。

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