1.1 材料

限制性内切酶购自赛默飞世尔科技公司；高保真DNA聚合酶、T4 DNA连接酶购自宝日医生物技术(北京)有限公司；His-tag单克隆抗体、HRP标记的羊抗小鼠二抗、His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型)、BCA蛋白浓度测定试剂盒、DAB显色试剂购自碧云天生物技术有限公司。其他试剂为国产或进口分析纯。

1.2 合成N蛋白基因

根据NCBI上公布的WENV察布查尔株N蛋白的基因信息(GeneBank: KY662263)，进行密码子优化、去除终止子、在阅读框两端分别引入NcoI和SalI序列及其保护碱基等操作后，委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成N蛋白基因。

1.3 重组表达质粒的构建与鉴定

将合成的N蛋白基因与表达载体pET-30a(+)分别经NcoI和SalI双酶切后，用T4连接酶进行连接，转化至DH5α感受态细胞，涂布于50 μg/ml卡那霉素的LB平板，37℃培养过夜后，采用菌液PCR、双酶切鉴定，将重组质粒送去生工生物测序。

1.4 重组N蛋白的诱导表达

将鉴定正确的原核表达质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞中，将重组菌于37℃振荡培养，直至OD₆₀₀值约为0.6，加入终浓度为0.5 mM的IPTG诱导6 h，收集菌体，加入裂解液及核酸酶进行裂解，4℃、8000×g 离心30 min，收集上清液与沉淀，进行10% SDS-PAGE蛋白电泳，通过考马斯亮蓝染色观察结果。