1.3 重组蛋白的表达及纯化

将上述质粒转化感受态细胞BL21（DE3），涂布氨苄平板并培养后，挑取单菌落接种于5 ml含氨苄抗性的LB液体培养基中，设置对照组和处理组，当在37℃培养OD_600nm值为0.6-0.8时，处理组中加入1 mM IPTG至终浓度为 1 mM，16℃诱导培养16-18 h。收菌，处理组超声破碎离心，分为上清、包涵体，进行SDS-PAGE电泳，考马斯亮蓝染色并脱色，即得到试表达的结果。确定pE184L表达后，将新鲜的菌液转移至含氨苄抗性的1L LB液体培养基中，按上述方法培养后，收集菌液，用PBS重悬菌液后，冰浴条件下超声破菌，离心并收集上清，通过镍亲和层析柱的方法，用不同浓度的咪唑洗脱目的蛋白。将收集的蛋白跑SDS-PAGE及WB鉴定，确定目的蛋白后，测量浓度，分装并置于-80℃保存。