1.3 中耳积液标本细菌培养  每例中耳积液标本留样两份，一份取样后立即送细菌培养+药敏，另一份置于-80℃冰箱中保存。待所有标本收集完毕，按照随机、双盲的标准抽取标本提取DNA。

1.4 中耳积液标本DNA的抽提及聚合酶链式反应(PCR)  按一管式临床样品DNA抽提试剂盒(上海生工生物工程有限公司)的实验步骤提取DNA。在经灭菌处理的50 μl PCR反应管中，按PCR反应体系加入试剂，根据4种不同的上游引物分别配制4个离心管，将样品管放置于PCR仪中，按设定的程序进行扩增反应。取3 μl 10×上样缓冲液，加入10 μl PCR产物中，混合后加入配制好的1％琼脂糖凝胶电泳中，连接电泳仪，电压为80 V，电泳30 min，于紫外透射仪下观察产物，以琼脂糖凝胶电泳成像分析仪观察分析电泳结果。