称取海藻酸钠溶于25 mL水中,充分溶解后备用。将酶液与壁材溶液按1:3(v/v)混和均匀,将其用注射器逐滴加入到10 mL,质量分数为3%的CaCl2溶液中固定30 min后形成微胶囊。经过滤,洗涤除去残留的CaCl2溶液及微胶囊表面的酶溶液,得到湿润的微胶囊,置于-20 ℃过夜,经真空冷冻干燥得到干态微胶囊[9]。
1.3.2 微胶囊包埋率的测定
称取干燥后得微胶囊0.5 g加入5 mL PBS溶液,高速剪切3 min后,于4 ℃ 5000 r/min离心5 min,使包埋在微胶囊中的脂肪酶全部释放出来[10]。在通过对铜皂法测定脂肪酶活性[11],从而测定出包埋率。包埋率按下式计算:
1.3.3 微胶囊的平均粒径
参照侯丹等人的方法改进[12],取未冻干的微胶囊30粒,利用游标卡尺测量后取平均值,每种微胶囊重复测定3次取平均值。
1.3.4 扫描电子显微镜(SEM)
采用扫描电子显微镜对微胶囊样品的表观形态进行观察。将微胶囊样品均匀的固定于样品台上,喷金90 s后,置于样品室进行观察。
1.3.5 微胶囊在模拟胃液中的耐受性
成人及儿童胃液储备液的配置:2 g氯化钠溶于800 mL去离子水中,分别用0.1 mol/L HCl调节pH至1和3再定容至1000 mL[13]。
正式消化前,将0.5 g微胶囊样品分别加到4.5 mL的成人及婴儿胃液储备液中,加入胃蛋白酶达到2000 U/mL,设置摇床温度为37 ℃,转速100 r/min,消化时间为1 h,分别在5 min,10 min,15 min,30 min,60 min收集微胶囊沉淀,洗涤后测定微胶囊中脂肪酶活性,并以未包埋的脂肪酶为对照。