实验材料为百薯2号,由河南科技学院甘薯育种团队提供。外植体从试验田的百薯2号植株中选取生长健壮的1cm左右甘薯顶芽,去掉多余叶片。随后在自来水下冲洗8~10s,并用毛刷洗去表面的灰尘及泥土。
1.2.1 外植体消毒
在超净工作台中将洗净的甘薯顶芽放入烧杯中进行表面消毒,采取A:75%酒精8s+0.1%升汞6~7min、B:0.1%升汞6-7min、C:75%酒精3~5s+0.1%升汞3~4min三种不同的消毒处理方法进行消毒,每种处理消毒10个茎尖,四次重复。消毒完成后用无菌水再次涮洗2~3次,随后将其置于已高温灭菌的操作滤纸表面待用。
1.2.2 茎尖剥离
将消毒好的甘薯顶芽利用解剖镜在超净工作台中先剥去幼叶,到还剩5~6层时,采用“一刀切”的快速剥离技术,即使用已消毒的解剖刀一刀切下,然后用解剖针分离的快速剥离技术。将解剖镜下较大的叶原基切除,随后用解剖针将茎尖顶端的生长点分离开来。