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免疫学检测技术
更新日期:2022-05-17     浏览次数:115
核心提示:酶联免疫吸附法(ELISA)ELISA基于抗原或抗体的固相化和酶标记,可利用自动装置进行大规模的样品检测,是最常用的血清学方法,也是OIE指定的ASF免疫学

 酶联免疫吸附法(ELISA)  ELISA基于抗原或抗体的固相化和酶标记,可利用自动装置进行大规模的样品检测,是最常用的血清学方法,也是OIE指定的ASF免疫学诊断方法。ASF血清诊断常用的抗原蛋白有 P30、P32、P72、P73、P54 等,p30 蛋白在 ASFV感染早期表达,是ASFV 主要的结构蛋白,较为保守;p54是ASFV感染早期表达的膜蛋白,具有良好的免疫原性,较为保守;p72是ASFV感染晚期表达的衣壳蛋白,该蛋白约占病毒体总质量的 31%~33%,蛋白大小为73.2 ku,由B646L基因编码,蛋白序列高度保守,具有良好的免疫原性,可产生较高滴度的 p72 特异性抗体[41-43]。p72 蛋白相对于 p30 和 p54,抗原性强而稳定[44-46],使其成为检测感染猪的主要抗原之一[47]。Vidal等[48]采用双抗体夹心 ELISA法检测 ASFV VP73蛋白,检测限为0.05 ug/mL,对于全病毒粒子的检测限则为2.3×102 PFU/mL。曹琛福[49]利用pET-52b(+)原核表达系统实现了ASFV的特异性P54蛋白的可溶性表达,基于VP54蛋白建立竞争 ELISA法,其结果特异性达到100%,特异性强,灵敏度高达96.22%。

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